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文心蘭種苗病毒驗證作業須知(106年5月8日廢止)

91年3月12日行政院農業委員會動植物防疫檢疫局

防檢三字第091 1484035號函訂定

95年2月23日行政院農業委員會動植物防疫檢疫局

防檢三字第0951484120號令修正

106年5月8日行政院農業委員會動植物防疫檢疫局

防檢三字第1061488353A號令廢止

一、行政院農業委員會(簡稱農委會)動植物防疫檢疫局(簡稱防檢局)為防止病毒病藉由文心蘭種苗傳播蔓延,以提昇文心蘭種苗及其產品品質,特依據「植物種苗疫病蟲害驗證輔導要點」第三點訂定本須知。

二、本須知用詞定義如下:

(一)文心蘭,指蘭科(Orchidaceae)中之文心蘭屬(Oncidium)、蜘蛛蘭屬(Brassia)、堇花蘭屬(Miltonia)、齒舌蘭屬(Odontoglossum)與相關屬及其雜交種之植物。

(二)病毒,指會感染文心蘭之胡瓜嵌紋病毒(Cucumber mosaic virus,簡稱CMV)、蕙蘭嵌紋病毒(Cymbidium mosaic virus,簡稱CymMV)及齒舌蘭輪斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,簡稱ORSV) (附錄一)。

(三)種苗,指以組織培養技術經由分生組織培養所形成之分生苗及其定植苗。

三、為辦理文心蘭種苗病毒驗證業務,防檢局委託農委會種苗改良繁殖場(簡稱種苗場)為受理機關,負責申請案之受理及發證事宜;委託農委會臺中區農業改良場、農委會臺南區農業改良場及種苗場為檢查機關,負責繁殖圃之設置、操作管理及種苗查驗等檢查工作;委託農委會農業試驗所或經防檢局認證核可之機關(構)為檢定機關,負責病毒之檢定工作。

四、得申請病毒驗證之種苗,包含組織培養瓶苗(簡稱瓶苗)及組織培養定植苗(簡稱定植苗)。申請瓶苗驗證者,應於母本進行初代無菌化分生繁殖前提出;申請定植苗驗證者,若源自瓶苗者,應於瓶苗出瓶定植前提出,若源自定植苗者,應於移植換盆前提出申請。母本及各階段種苗之檢查時間,申請者應於申請書中載明。

五、申請種苗病毒驗證者,應填具申請書,向受理機關提出申請,並繳交檢查費。驗證結果於申請者繳交檢定費後由受理機關通知,符合規定之種苗另核發證明書。

六、各級繁殖圃設置及操作管理應符合下列規定:
(一)母本保存園

1.設置條件:母本應隔離栽培於具阻隔病毒媒介昆蟲及軟體動物入侵功能之設施內。

2.操作管理:

(1)母本應在申請驗證前移入符合規定之母本保存園內。母本單株應標示品系並獨立編號,植株間不得相互接觸。

(2)母本保存園應與其他培養場區隔,並嚴格控管人員出入,避免任何人為接觸造成感染之機會。栽培期間使用之盆缽、介質、器具及花梗固定用器材等,應採用全新資材。

(3)培育過程中植株若需修剪或整理,使用之工具應經附錄二所述方式消毒,並以單株單剪方式為之,以避免植株間之相互污染。

(4)母本保存園應定期施行防治病毒媒介昆蟲及軟體動物之措施。

(5)母本保存園應建立管理紀錄,記錄母本之種植日期及病蟲害防治措施等資料,供檢查人員現場查驗時參考。

(二)組織培養場

1.設置條件:生產瓶苗之組織培養場(簡稱組培場),應具備高溫高壓消毒設備、置放瓶苗之培養空間、繁殖無病毒瓶苗之無菌操作台及相關儀器設備。

2.操作管理:組培場管理人員應記錄母本之編號、瓶苗生產數量及批號。瓶苗各繁殖階段之管理應符合以下規定:

(1)進入組織培養繁殖之初代培養植體,應延續母本編號給與適當批號以利追蹤,各繼代增殖瓶苗亦同。屬於同一品系不同單株所誘發產生之培養植體,在母本擁有者與組培場雙方共識下,得混合成為單一母瓶或重複母瓶,並分別予以適當編號,其數目由雙方決定並告知受理單位,以為後續採樣之依據。

(2)為建立組織培養母瓶所進行之植物材料消毒與接種,及各階段繼代增殖作業,應於繁殖無病毒瓶苗之無菌操作台內進行。

(3)繁殖無病毒種苗之無菌操作台內所使用之工具應經附錄二所述方式消毒。工具與操作盤應隨材料批號更換。操作人員工作前應行必要之消毒以避免病原污染。

(4)組培場應建立管理紀錄,記錄母瓶及各繼代增殖子瓶瓶苗之移植日期等資料,供檢查人員現場查驗時參考。

(三)定植苗培養場

1.設置條件:申請定植苗病毒驗證之定植苗培養場設施,應具阻隔病毒媒介昆蟲及軟體動物入侵之功能。

2.操作管理:

(1)瓶苗定植過程若需浸泡殺菌藥劑或洗滌,同一批號瓶苗以使用經消毒處理之單一容器為限,不同批號不得混用。

(2)同一批待驗證瓶苗或定植苗之移植應由專人負責,並不得與其他非驗證瓶苗或定植苗之移植混同進行。

(3)移植操作應在消毒工作台上進行,並以新鮮配製之千分之五至千分之六次氯酸鈉溶液處理台面一分鐘以上,再以乾淨紙巾擦乾。

(4)操作人員應著專用工作服,進行移植操作前應以肥皂充分洗手,完成不同批號之瓶苗或定植苗定植後,應重複前述之台面消毒處理及充分洗手後方能進行其他批號種苗之移植。工作服應每日更換,並應以千分之五至千分之六次氯酸鈉溶液處理一分鐘以上後清洗。

(5)瓶苗或定植苗移植時應使用全新盆缽及栽培介質。移植後之定植苗應整齊排列於植床上,避免葉片重疊,並明確標示來源批號、移植日期及數量,且應依一般預防病毒傳播之要領進行栽培管理。

(6)定植苗培養場應建立管理紀錄,記錄定植苗之定植日期及病蟲害防治措施等資料,供檢查人員現場查驗時參考。

七、病毒檢定種類、檢查程序及檢查方法規定如下:
(一)病毒檢定種類 1.母本:ORSV、CymMV及CMV。 2.瓶苗:ORSV及CymMV。 3.定植苗:ORSV及CymMV。
(二)檢查程序及方法
1.母本

(1)母本保存園之設置及操作管理應符合第六點第一款規定,經檢查人員檢查確認後,始得進行後續採樣檢定。

(2)母本應進行二次檢定,間隔一至二個月,第一次檢定符合分級標準規定者始得進行第二次檢定。第一次檢定採用酵素聯結抗體免疫測定法(簡稱ELISA),第二次檢定採用反轉錄聚合酶連鎖反應法(簡稱RT-PCR)

(3)檢查人員進行採樣時,應以單株為單位,切取適量葉片及根部,置於封口塑膠袋中,標明植株號碼後送交檢定機關進行病毒檢定。採樣時各單株應使用單一工具。

(4)檢定機關應於檢定完成後五個工作日內,將結果通知檢查機關及受理機關。受理機關應於接獲檢定結果五個工作日內,通知申請者繳交檢定費,並於申請者繳費後核發結果通知。

(5)申請者應將各檢定階段確認感染病毒之母本立即移出保存園,檢查人員應擇期前往現場確認,未依規定移除感染母本者,即終止該申請案之後續驗證程序。

2.瓶苗

(1) 組培場之設置及操作管理應符合第六點第二款規定,經檢查人員檢查確認後,始得進行後續採樣檢定。

(2)檢查人員以母瓶編號為單位,抽取各母瓶內瓶苗送交檢定機關進行病毒檢定,每一母瓶編號至少抽取一瓶,每一母瓶逢機抽取五個培植體混合為一個樣品,檢定方法採用RT-PCR。

(3)檢定機關應於完成母瓶瓶苗檢定後五個工作日內,將結果通知檢查機關及受理機關。受理機關應於接獲檢定結果五個工作日內,通知申請者繳交檢定費,並於申請者繳費後核發結果通知。組培場應於接獲結果通知後立即將不符分級標準規定之母瓶批號移除,始得進行符合分級標準規定批號之繼代增殖及後續驗證程序。

(4)申請者若委託不同組培場進行繼代繁殖,應於申請時註明,且繼代繁殖組培場之設置及操作管理亦應先經檢查人員查證,符合第六點第二款規定者,始得進行後續驗證程序。

(5)組培場完成子瓶繼代繁殖後,應主動通知受理機關安排檢查時程。進行子瓶瓶苗之檢查時,檢查人員應核對合格母瓶編號,並抽樣送檢定機關進行檢定。每一編號至少抽取三個子瓶,每一子瓶逢機抽取五個植體混合為一個樣品,檢定方法採用RT-PCR。

(6)檢定機關應於完成檢定後五個工作日內,將結果通知檢查機關及受理機關。受理機關應於接獲結果五個工作日內,通知申請者繳交檢定費,並於繳費完成後,始核發結果通知,符合規定之種苗另核發證明書。

3.定植苗

(1)定植苗培養場之設置及操作管理應符合第六點第三款規定,經檢查人員檢查確認後,始得進行後續採樣檢定。採樣檢定時間由申請者自行預估並於申請書中載明,若有變動應立即通知受理機關。

(2)定植苗之檢查,由檢查人員抽樣送檢定機關進行檢定,定植苗若領有病毒驗證分級證明之瓶苗者,抽樣比例為千分之五,若未領有病毒驗證分級証明者,抽樣比例百分之一,檢定方法採用ELISA。

(3)檢定機關應於完成檢定後五個工作日內,將結果通知檢查機關及受理機關,受理機關應於接獲結果五個工作日內,通知申請者繳交檢定費,並於申請者繳費後核發結果通知,符合規定之種苗另核發證明書。

八、驗證標準及有效期限規定如下:
(一)瓶苗

1.母本保存園及組培場之設置及操作管理應符合本須知之規定,並由檢查人員現場查驗確認。經過二次檢定結果均未檢測出CymMV及CMV二種病毒之母本單株,始得進行分生繁殖。

2.母瓶瓶苗及其所增殖之子瓶瓶苗,經RT-PCR方式檢定結果符合病毒感染分級標準者,發給病毒檢定證明書。驗證有效期限為自發證日起三個月。

3.母瓶瓶苗及其所增殖之子瓶瓶苗,檢定之病毒感染分級標準如下: (1) 特優:無CymMV及ORSV病毒。 (2) 優良:無CymMV病毒。

(二)定植苗

1.定植苗培養場之設置及操作管理應符合本須知之規定,並由檢查人員現場查驗確認,始得進行後續之檢查與抽樣檢定。

2.定植苗經檢查人員抽樣並送交檢定機關檢定,依檢定結果符合病毒感染分級標準者,發給病毒檢定證明書,驗證有效期限為自發證日起三個月。

3.檢測之病毒感染分級標準如下: (1)特優:無CymMV及ORSV病毒。 (2)優良:無CymMV病毒。 (3)標準:所抽驗之樣品中CymMV病毒感染率低於百分之五。

九、收費規定如下:
(一)檢查費:每件申請案收取一千元。
(二)檢定費:依所採用檢定方法及所抽檢樣品數核計;每件母本樣品包含CymMV、ORSV及CMV三種病毒之檢定,採用ELISA者收取三十元,採用RT-PCR者收取三百元。前項費用之收支依照預算程序辦理。

十、為鼓勵文心蘭組培場及定植苗培養場申請種苗病毒驗證,防檢局得成立評選委員會,評選優良之「文心蘭種苗病毒驗證示範生產場」。

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